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导读
1.基础概念
2.细胞凋亡流式图怎么看？
3.流式细胞术中的“设门”是什么？
4.如何正确设门？
01
基础概念
检测细胞凋亡时，样本中除了有活细胞外，还会存在以下3种状态的细胞：
1）早期凋亡（早凋）
2）晚期凋亡（晚凋）
3）坏死
02
细胞凋亡流式图怎么看？
案例1
元素解读
①纵坐标代表该细胞样本在这个通道上的荧光强度；PI是一种核酸染料，用于检测细胞凋亡，细胞膜完整的情况下无法进行细胞染核
②横坐标代表该细胞样本在这个通道上的荧光强度； V是用于检测细胞凋亡的试剂（原理详见基础概念）， V可带上荧光素（如FITC、APC等）
③一个点代表一个细胞
④（PI-/ V-）双阴性，为活细胞，占比是90.6%
⑤（PI+/ V-），为机械损伤等其他细胞，占比是0.06%
⑥（PI-/ V+）酰怎么读，为早凋细胞，占比是9.20%
⑦（PI+/ V+），为晚凋细胞和坏死细胞，占比是0.16%
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案例2
元素解读
①变量：是否进行UVB照射
②对照组
③一种药物
结果解读
V-FITC/PI双染显示，UVB（+）组中凋亡细胞的比例显著增加（占比23.2%），但在治疗后细胞凋亡的比例降低（占比7.4%）。
03
流式细胞术中的“设门”是什么？
设门就是在流式细胞仪生成的散点图或直方图上，通过手动或自动的方式划定一个或多个区域（即“门”），这些区域代表了具有特定特征的细胞群体（通俗点说，设门就是选中目标研究细胞群）。
设门的形状可以是任意的，如线性门、矩形门、圆形门、椭圆形门、多边形门和四象限门（十字门）等，具体形状取决于细胞类群分布的特点和研究目的。
04
如何正确设门？
1）明确分析目的
在设门之前，首先要明确分析的目的，即需要区分哪些细胞群体。这有助于在复杂的细胞分布图中快速找到目标细胞。
2）选择合适的参数
流式细胞术可以检测多种参数，如前向散射光（FSC）、侧向散射光（SSC）、荧光强度等。根据分析目的选择合适的参数进行设门。例如，FSC和SSC常用于区分细胞大小和颗粒度，荧光强度则用于检测细胞内的特定分子。
3）设定阈值
使用FSC或SSC等物理信号设定阈值，以排除细胞碎片、气泡和激光背景噪声等干扰因素。阈值设定应尽可能客观，以减少主观判断带来的误差。
4）联合设门
利用多个参数联合设门可以更加准确地区分细胞群体。例如，可以使用FSC和SSC联合设门来区分不同大小的细胞群体，再结合荧光信号进一步区分表达特定分子的细胞。
5）应用荧光阴性对照
在设门过程中，应用合适的荧光阴性对照有助于区分阳性信号和阴性的荧光背景。这可以提高设门的准确性和可靠性。
6）排除死细胞
通过检测细胞活性的标记（如PI或7-AAD）来区分活细胞与死细胞。在设门时，应确保将死细胞排除在分析区域之外。
7）使用共享标记物
如果合适，可以使用一种在所有目标细胞中都表达的共享标记物（如CD45白细胞标记）进行染色。这有助于在分析稀少细胞类型时提高设门的准确性。
8）验证设门结果
设门完成后，应使用显微镜观察或其他验证手段来确认设门的客观性和准确性。这有助于减少主观判断带来的误差。
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